湖南唾液外泌體

外泌體提取在短時(shí)間（一周之內）使用，可以放在4度保存，如果長(cháng)時(shí)間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進(jìn)行分裝，分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法：外泌體分離之后，需要經(jīng)過(guò)一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物，多角度進(jìn)行鑒定。l、透射電鏡鑒定法：簡(jiǎn)稱(chēng)TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結構觀(guān)察，即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。2、納米顆粒追蹤分析法：簡(jiǎn)稱(chēng)NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。外泌體具有檢測包括病癥在內的許多病理狀況的潛力，可用于對心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監測。湖南唾液外泌體

Knepper等通過(guò)對透射電鏡得到的200個(gè)囊泡進(jìn)行粒徑分析，結果表明尿液中外泌體的粒徑分布約為35～40nm，磷脂雙分子層厚度約為直徑的1/5～1/10。透射電鏡結合免疫金標記法能夠得到外泌體表面特征分子的信息，有助于揭示外泌體的產(chǎn)生機制與來(lái)源。動(dòng)態(tài)光散射(dynamiclightscattering，DLS)和納米顆粒跟蹤分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis，NTA)都是利用光學(xué)手段獲得囊泡粒徑分布的方法。兩者的不同之處在于動(dòng)態(tài)光散射通過(guò)檢測散射光的強度計算得到顆粒粒徑，而納米顆粒跟蹤分析通過(guò)追蹤單個(gè)粒子的運動(dòng)軌跡計算得到樣品濃度、粒徑分布等信息。胸水外泌體PKH26外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進(jìn)行標記，可用流式細胞儀檢測到陽(yáng)性表達，從而實(shí)現對外泌體的定量。但流式細胞技術(shù)檢測時(shí)需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過(guò)程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導致一次觀(guān)察到多個(gè)顆粒，從而導致數據不準確。因此，為了通過(guò)流式細胞儀觀(guān)察，需要將外泌體通過(guò)免疫捕獲或共價(jià)結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細胞術(shù)之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀(guān)察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當樣品通過(guò)流式細胞儀時(shí)采集熒光信號，不只可以對外泌體進(jìn)行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進(jìn)行定量或分類(lèi)。

幾乎所有的細胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體，不同的細胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能，這些外泌體參與了一系列生理和病理過(guò)程，如ai癥發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調節、組織愈合等。來(lái)自血細胞(包括血小板、白細胞和紅細胞)的外泌體具有參與凝血、提供促血管生成因子、誘導血管生成等生理功能;妊娠期外泌體能夠影響局部血管生成、調節分化、激huo免疫、促進(jìn)胚胎發(fā)育;肝臟細胞產(chǎn)生的外泌體有利于維護肝臟內穩態(tài)。由此可見(jiàn)，正常細胞產(chǎn)生的外泌體對維持機體的正常生命活動(dòng)起重要作用。外泌體可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化等方方面面。

細胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)運輸來(lái)完成細胞間通訊通路的重要媒介，根據它們的大小和發(fā)生分為三類(lèi)，包括外泌體、微泡和凋亡小體。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡，由多種細胞分泌，內含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細胞因子或遺傳物質(zhì)。來(lái)源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子。近年來(lái)，隨著(zhù)外泌體研究的不斷深入，它的應用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域、醫學(xué)基礎和免疫領(lǐng)域、寄生蟲(chóng)領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統、內分泌代謝系統等。活內的外泌體動(dòng)態(tài)（哪個(gè)外泌體遷移至何處）也會(huì )成為今后需要努力研究的重要課題。外泌體的發(fā)展

外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體，是具有生物活性的脂雙層囊泡。湖南唾液外泌體

在當代準確醫療的大趨勢下，外泌體的發(fā)現和研究為肺病的早期診斷和醫治提供了嶄新的方向。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現和早期診療提供可靠依據。根據種瘤來(lái)源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉移過(guò)程中的作用及相關(guān)機制的研究，臨床醫療人員可以針對不同的患者制定合適的醫治方案，以達到改善肺病患者生存率，延長(cháng)肺病患者生存時(shí)間的目的。但是，針對外泌體的研究還存在諸多的問(wèn)題有待廣大研究者解決，如：外泌體的純化及標記方法、如何尋找外泌體的靶基因、外泌體的作用機制及信號通路等。總而言之，外泌體的研究有著(zhù)廣闊的前景，基于外泌體與肺病的研究，有望研發(fā)出能夠應用于肺病臨床診斷和醫治的有效措施，造福更多的患者。湖南唾液外泌體

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