浙江CD63外泌體慢病毒

外泌體可以由體內或體外培養的幾乎所有類(lèi)型的細胞分泌,并廣fan存在于血漿、膽汁、尿液、母乳、唾液、胸腔積液、淋巴、胃酸、支氣管肺泡灌洗液、腦脊液、眼淚、滑膜液、羊水、腹水、鼻分泌物和子宮抽吸物液體等體液中。目前,基于不同的分離原理,研究者建立了五種主要的提取純化技術(shù),分別為基于質(zhì)量密度的超速離心技術(shù)、基于粒徑大小的分離技術(shù)、基于溶解性質(zhì)的聚合物沉淀技術(shù)、基于免疫親和原理的分離技術(shù)和基于流體性質(zhì)的微流控技術(shù)。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎，它可能活躍受體并隨后導致相關(guān)信號通路的活躍。浙江CD63外泌體慢病毒

外泌體的組成較為復雜，其內含有多種生物大分子，如：核酸（雙鏈DNA和各種RNA亞型）、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。這些分子被外泌體攜帶進(jìn)入血液循環(huán)，而后被靶細胞吸收，從而調節靶細胞基因表達和細胞功能。此外，外泌體相關(guān)的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子，調節致病基因或抑病基因的表達，參與細胞分化、細胞凋亡及細胞信號的傳導。有研究表明，外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成、增強種瘤細胞的侵襲和轉移能力、介導種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進(jìn)而促進(jìn)種瘤的發(fā)展。浙江CD63外泌體慢病毒外泌體發(fā)揮功能方式：細胞-細胞之間的通訊，譬如抗原遞呈，這是發(fā)揮功能的主要方式。

外泌體（Exosome）介導瘤細胞的增殖過(guò)程。瘤細胞通過(guò)與自身微環(huán)境的信息交流促進(jìn)瘤細胞的增殖，而外泌體（Exosome）可以充當這種信息載體。當細胞中出現基因突變時(shí)，外泌體（Exosome）會(huì )通過(guò)膜融合把這種突變信息傳遞至其他的正常細胞，從而導致原病基因的喚醒、抗凋亡基因的表達，使瘤細胞獲得增殖特性。瘤細胞來(lái)源的外泌體（Exosome）還可以通過(guò)直接抑制免疫細胞，促進(jìn)瘤細胞逃避免疫監視，為瘤細胞在體內生長(cháng)創(chuàng )造條件。然而，雖然當前外泌體生物學(xué)仍然不成熟，但越來(lái)越多的興趣和資金投入必將加速外泌體基礎研究進(jìn)展和臨床轉化。

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現在也被用來(lái)沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì )破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取：近幾年來(lái)，市場(chǎng)上已出現各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過(guò)特殊設計的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái)。隨著(zhù)外泌體研究的不斷深入，它的應用已經(jīng)涉及醫學(xué)基礎和免疫領(lǐng)域、寄生蟲(chóng)領(lǐng)域。

外泌體起源于多泡體,以細胞管腔內囊泡的形式存在.細胞的胞吞形成帶有外源性抗體的內體小泡,在高爾基體等細胞器的作用下形成早期核內體,早期核內體的囊膜內陷、突入形成多個(gè)小囊泡,并選擇性的接受細胞內的蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)等成分,較終形成晚期核內體,晚期核內體與細胞膜融合,并將外泌體排出胞外。這是一個(gè)連續而又復雜的過(guò)程,從內體小泡到成熟外泌體,需要在各細胞器間傳遞并包裝,包括:TSG101、Alix蛋白、CD63、CD81、神經(jīng)酰胺、膽固醇等。外泌體的排出跟其他胞內小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的調控,敲除細胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌體不能排出,且從高爾基體到晚期核內體的囊泡運輸不受影響。外泌體可以通過(guò)多種方法給藥，靜脈內給藥是較常用的途徑。臨床診斷級別外泌體

有報導指出，外泌體內miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過(guò)程。浙江CD63外泌體慢病毒

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì )影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養和體內注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不寬泛。浙江CD63外泌體慢病毒

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