廣州體液外泌體

外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細胞具有交換信息的功能。作為細胞間信號傳導的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標記話(huà)題比較熱門(mén)。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍，但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實(shí)驗技術(shù)，關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多。例如，外泌體提純方法中，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質(zhì)，給后續實(shí)驗產(chǎn)生了許多障礙。抗體親和法和密度梯度離心法，雖然可以提取到高純度的外泌體，但不能提取完整外泌體，無(wú)法分析外泌體具有的生理功能，也是兩種提取方法的問(wèn)題所在。而免疫印跡法（WB）和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法，又存在檢測時(shí)需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標記蛋白。外泌體的異質(zhì)性可以根據其大小、含量(載物)、對受體細胞的功能影響以及細胞來(lái)源來(lái)區分。廣州體液外泌體

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過(guò)樣本，激光在腔室內與顆粒相互作用時(shí)會(huì )發(fā)生散射，通過(guò)裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運動(dòng)，實(shí)現顆粒可視化。然后使用Stokes-Einstein方程來(lái)測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數據收集和分析參數，另外，NTA比較難區分與外泌體具有相似布朗運動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體，因此無(wú)法排除其他物質(zhì)干擾。外泌體亞型隨著(zhù)今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴大臨床應用。

在免疫系統中，淋巴細胞、樹(shù)突狀細胞、巨噬細胞、肥大細胞等均可以產(chǎn)生外泌體。研究表明免疫細胞來(lái)源的外泌體能夠明顯影響機體的免疫調節機制，包括調節抗原呈遞、免疫激huo、免疫監督等。不同免疫細胞來(lái)源的外泌體功能不同，以樹(shù)突狀細胞(該細胞具有免疫刺激能力，是目前能夠激huo初始T細胞的抗原遞呈細胞)來(lái)源的外泌體為例，其外泌體的免疫刺激作用取決于來(lái)源細胞的成熟狀態(tài)。成熟的樹(shù)突狀細胞外泌體內包含能夠直接激huoT細胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ，共刺激分子如CD40、CD8、CD86和熱激蛋白，這些分子使樹(shù)突狀細胞來(lái)源的外泌體具有抗原呈遞、調節免疫響應的生物功能。

外泌體的相關(guān)成分：1、外泌體的膜同細胞一樣，是磷脂雙分子層。2、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈。3、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol、ceramide、SM、PC，限制膜流動(dòng)，參與包括跨膜信號轉導、物質(zhì)內吞、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能。6、外泌體中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA；同時(shí)還有一些蛋白、脂類(lèi)也能被包裹到外泌體中。7、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU），進(jìn)行主動(dòng)包埋。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù)。外泌體在心臟修復中起著(zhù)關(guān)鍵作用。

外泌體調控毛發(fā)根部的囊干細胞的機能，延長(cháng)毛發(fā)根部的囊生長(cháng)期，同時(shí)活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊，使其提前進(jìn)入新的生長(cháng)周期，實(shí)現了毛發(fā)的再次生長(cháng)。骨衰老小鼠注射外泌體試驗證明：年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機。來(lái)源于脂肪組織中的干細胞分泌一些信號分子和生長(cháng)因子，可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長(cháng)周期的毛發(fā)根部的囊干細胞進(jìn)行分化，向上遷移生成表皮細胞和皮脂腺，向下遷移生成毛母細胞。毛發(fā)根部的囊的生長(cháng)周期決定毛發(fā)的生長(cháng)周期，而毛發(fā)根部的囊干細胞的機能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度，外泌體靶向調控毛發(fā)根部的囊干細胞的功能。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)。杭州外泌體脂質(zhì)組學(xué)

不同類(lèi)別的外泌體囊泡有三個(gè)征：表面具涂層的膜泡、內含纖維的膜泡、電子致密囊泡。廣州體液外泌體

為獲得外泌體的大小、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息，可以通過(guò)電鏡、動(dòng)態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細胞儀等對外泌體進(jìn)行表征。通過(guò)電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息，不同類(lèi)型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同，得到的外泌體形態(tài)存在差異。例如，在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中，外泌體呈現囊泡獨有的茶托形，可能由于樣品在固定或染色過(guò)程中極度脫水，導致外泌體塌陷所致。與之相反，在冷凍電鏡中外泌體呈現圓形，由于不會(huì )脫水變性，所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實(shí)狀態(tài)。另外，由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率，也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息。廣州體液外泌體

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